产品货号：
MT0031
中文名称：
Klenow片段(无外切酶活性)
英文名称：
Klenow Fragment(exo-)
产品规格：
1000U
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是DNA聚合酶I的N末端截短物，它保留了DNA聚合酶活性，但5'-3'核酸外切酶活性缺失。该酶进一步定点突变（D355A，E357A）去除了其3'-5'的核酸外切酶活性。因此该DNA聚合酶无任何外切酶活性，仅包含了DNA聚合酶活性，广泛用于标记探针制备、cDNA第二条链的合成等建库试验。
- 用随机引物制备探针。
- 随机引物法标记。
- cDNA第二条链的合成。
一个活力单位即在37℃条件下，30分钟内催化10nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。
| 组分 | 规格 |
| Klenow片段(exo-,10U/μL) | 100μL |
| 10×Klenow Buffer | 1mL |
保存：-20℃，有效期2年。
10×Klenow Buffer：
500mM Tris-HCl (pH8.0 at 25℃)，50mM MgCl2，10mM DTT。
75℃加热20分钟。
随机引物生物素标记反应：
- 按以下成分配制反应液
成分 用量 10×Klenow Buffer 5μL 模板DNA 0.1～2μg dATP dCTP dGTP (2mM each) 0.5μL Biotin-dUTP or dATP(2mM) 0.5μL random hexamer(125μM) 10μL ddH2O 至50μL - 95℃ 5min冰上放置5min。
- 加入0.5μL Klenow片段(exo-,10U/μL)，混合均匀。
- 37℃反应15min。
- 75℃加热20min失活。
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